怎样确定PVDF转印膜是否转成功?
可以采用染色法来确定转膜是否成功,PVDF转印膜染料分2类,可逆染料在评估印迹之后可被从膜上洗掉。这些操作不干扰后续的免疫检测或印迹上蛋白的其它分析。最常用的可逆蛋白染料是丽春红。可逆染料的主要缺点在于它们的灵敏度不及不可逆染料。由于印迹上高丰度蛋白的染色模式通常也能很好地提示低丰度蛋白在多大程度上转移,可逆染料灵敏度不高的缺点在大部分情况下并不影响使用。
不可逆染料通常表现出很优的灵敏度,但会干扰或阻止蛋白的进一步分析。不可逆染料有氨基黑和考马斯亮蓝等。
图: 小牛肝脏蛋白在电转到Immobilon®-P转印膜后的观察:(A) 透照,(B) 考马斯亮蓝,(C) 丽春红,(D) 氨基黑 和 (E) CPTS总蛋白染料。从左到右,每条泳道依次是分子量标准品和12.2 g、6.1 g、3.1 g裂解液。
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