PVDF转印膜的孔径怎么选?
一旦转印膜被浸湿,蛋白结合可通过蛋白与膜的接触而实现。由于蛋白与膜的结合贯穿整个膜的厚度(深度),结合能力是由孔的内部表面积来决定的。0.2um PVDF转印膜内部表面积大约是0.45um PVDF转印膜的三倍,使其吸附能力更高。
从下图实验中,可以看出,20KD以下蛋白选用0.2um PVDF转印膜, 20KD以上蛋白选用0.45um 转印PVDF膜。

图: 延长电转时间时0.45um PVDF转印膜和0.2um PVDF转印膜结合蛋白的效果。分子量标准品(第1、3、5、7泳道)和小牛肝裂解液(第2、4、6、8泳道)通过槽转印法转移到0.45um PVDF转印膜和0.2um PVDF转印膜,并用考马斯亮蓝染色。在第一张转印膜后再放一张0.2um PVDF转印膜以捕获穿过的蛋白。(第5和6泳道在0.45umPVDF后面;第7和8泳在0.2um PVDF后面。即第三张膜是放在第一和第二张膜的后面)